Isolation d'une bonne souche
Dans cette section, il sera décrit comment :
- Isoler du mycélium saint sur une boîte de Pétri contaminée en partie.
- Isoler une souche unique sur une boîte de Pétri où il en pousse une multitude de différente.
Isolation de mycélium saint (non-contaminé)
Lors de l'innoculation de spores sur une boîte de Pétri, à partir d'une empreinte, il peut arriver que cette dernière contienne quelques micro-organismes non-désirables, qui vont pousser avec le mycélium.
Il faut donc couper à l'aide du scalpel (dans des bonnes conditions d'hygiène et dans la boîte à inoculation) les bouts de mycélium que ne sont pas touché par la contamination et le transférer sur une boîte de Pétri vierge.
Attention :
- Lors de l'isolation du mycélium saint qui se trouve très proche de la partie contaminée, le scalpel ne doit pas être chaud, sinon il risquerait de vaporiser du agar contaminé et de répandre encore plus la contamination.
- Il faut aussi noter que l'on transfère toujours un bout de agar dans une boîte vierge, on ne fait pas le contraire, à savoir essayer de retirer des bouts contaminés pour essayer d'enrayer l'infection.
- Une fois une boîte contaminées utilisée pour être en couper un bout, celle-ci est jetée ou mise en quarantaine.
En plusieurs étapes vous devriez pouvoire obtenir une souche de mycélium pure. Encore une remarque, essayez de ne propagez les souches qui ont l'aspect voulu (voire le paragraphe suivant.)
Il faut encore noter que si vous inoculez une boîte de Pétri avec une solution (de spores ou de mycélium) qui est contaminée, il sera beaucoup plus dure d'isoler du mycélium, voire même impossible. Quelques techniques sont décrite dans le 2ème livre de P. Stamets (p. 101).
Si après tous vos efforts, et en étant sûr que ce n'est pas vous qui apportez la contamination, vous ne parvenez pas à obtenir une souche non-contaminée, achetez-vous une nouvelle empreinte ... (voire adresses.)
Une fois débarassé de l'infection, vous pouvez sélectionez une bonne souche (voir ci-dessous)
Isolation d'une souche (sélection)
Introduction
Cela n'a pas été précisé dans la partie éléments de mycologie mais le shéma qui y est présenté ne représente ce qui se passe que pour deux spores. Dans la réalité ce sont des milliers de mariages entre spores qui ont lieu en même temps ... d'où l'apparition d'une foule de souche différente sur la boîte de Pétri, qui vont entrer en compétition.
Cette compétition entre souche va prendre la forme de secteur sur la boîte de Pétri :
Mycélium de psilocybe cubensis formant des secteur sur agar
Les cultivateurs ont remarqué de façon empirique que les souches les plus fertiles étaient celles dont l'apparence est la plus filendreuse enchevetrée (quart nort-ouest, ci-dessus). J'ai également constaté que le type filendreux linéaire (ci-contre) donnait également de très bons résultats pour le psilocybe cubensis (bien que l'image ci-contre soit du mycélium de psilocybe cyanescens).
Il faut donc retenir que le mycélium qui a l'aspect cottoneux ne doit pas être conservé ! Ceci n'est valable que lorsque on se trouve
en présence de sectorisation, pour certaine espèces, le mycélium cottoneux est suffisant.
Pour vous faire une idée, essayez ceci :
Si vous avez une boîte de Pétri contenant des secteurs de mycélium cottoneux et linéaire, sortez la boîte de la pénombre durant 15 jours(simplement en l'exposant à la lumière du jour indirecte durant la journée) et mettez la à sa température de fruitaison, qui est de 3-5 deg. C. en dessous de la température d'incubation. Vous constaterez l'apparition de petit noeux de mycélium, ayant l'aspect de concentration blanche plus petites qu'une tête d'épingle. Ceux-ci sont autant de signes de fertilité. Vous vous apercevrez qu'ils sont beaucoups plus nombreux sur les parties non-cottoneuses.
La procédure
Après avoir lu ce qui précède, vous devinez facilement la procédure :
- Découpez un petit bout de mycélium au milieu (ou au bord extérieure, cad dans le sens du rayon) d'un secteur ayant l'aspect se rapprochant le plus du type linéaire enchevétré et le moins du type cotoneux.
- Mettez ce bout sur une boîte de Pétri vierge et laissez pousser jusqu'à l'apparition de secteur bien marqués.
- Répétez les étapes précédentes jusqu'à obtenir une souche de bon aspect (non-cotoneux) et ne formant plus de secteur
Bien evidemment ce qui précède doit se faire dans de bonnes conditions d'hygiène et dans la boîte à inoculation.
Pourquoi veut-on éviter que la souche ne sectorise ? Cela nous garantit que le mycélium ne perdra pas d'énergie en faisant la compétition avec une souche voisine lorsqu'il sera dans le seigle. De cette manière la quantité de champignons sera maximisée.
Je rappelle que si vous êtes intéressé uniquement dans la culture de psilocybe cubensis, l'obtention d'une souche unique sur agar n'est pas nécessaire, l'inoculation multispore liquide avec contrôle de non-contamination sur agar est largement suffisant. En effet le psilocybe cubensis est sans doute l'espèce la plus facile à apprivoiser. Même en présence de souche relativement peu fertile, vous n'aurez pas trop de problème à obtenir des champignons matures.