4. Procédures à suivre pour garder une bonne hygiène

Introduction

Comme je l'ai déjà dit auparavant, il faudra s'efforcer de garder un maximum de propreté afin d'éviter que des contaminants ne s'introduisent dans notre milieu de culture (pot de seigle, solution de spores, boîte de Pétri).

Le premier effort que vous avez fait a été de construire la boîte à inoculation : à l'intérieur, les mouvements d'air son grandement atténués. Bien que des micro-organismes subsistent dedans, il auront beaucoup moins l'occasion de se déplacer pour aller contaminer notre culture.

Lors de l'utilisation de la boîte à inoculation

15 mn avant l'utilisation de la boîte :

• Se laver soigneusement les mains et les avant-bras. Avoir pris une douche le jour même et porter des habits propres.
• A l'aide d'un chiffon propre et humide, laver l'extérieur ainsi que les recoins de la boîte. Bien le rincer et recommencer en l'humidifiant avec le spray contenant la solution à 10 % d'eau de Javel.
• Avec un autre chiffon propre, répéter l'opération ci-dessus pour l'intérieur de la boîte.
• Refermer le plexi de la boîte. Ce dernier restera ainsi jusqu'à la fin de la session.
• Sprayer la solution 10% : un bon coup dans chaque trou pour les mains, légèrement en direction du haut. Essuyer l'intérieur, en passant les mains par les trous prévus à cet effet, en utilisant le 2ème chiffon propre (auparavant rincé et humidifié à l'aide de la solution 10%).
• Introduire les pots, ustensiles, boîtes, en étant sur que ces derniers soient parfaitement propres. Répéter l'étape ci-dessus (spray+rince par les trous) et se relaver les mains une dernière fois.

Utilisation du scalpel ou de la boucle

• Avant chaque session, il faudra les nettoyer soigneusement à l'eau ou la solution de Javel puis les passer à la flamme.
  Attention: Le terme passer à la flamme signifie faire chauffer au rouge le bout de l'instrument (ou toute partie entrant en contact avec le milieu de culture).
  Attention: Après avoir passer un instruments à la flamme il faut le laisser refroidir suffisamment, en le plongeant dans le agar de la boîte de Pétri ou dans tout autre solution stérile puis attendre un peu de façon à être sur que la température de l'instrument ne tue pas le mycélium ou les spores. La température létale est de l'ordre de 45 deg. C. Je vous conseille de faire des essais pour vous rendre compte du temps que l'instrument met pour refroidir.
• Entre la manipulation de deux boîtes de Pétri ou de deux bocaux qui nécessite l'utilisation de la boucle ou du scalper, il faut absolument passer l'instrument à la flamme et le laisser refroidir de façon à éviter la transmission d'éventuels contaminants d'un récipient à l'autre.

Recommandation pour les Boîtes de Pétri

• Lors de la manipulation d'un boîte de Pétri contenant des traces de contamination (dans le but d'isoler du mycélium sain), il est impératif de laisser refroidir le scalpel. En effet si vous plongez le scalper bouillant proche d'une zone contaminée du agar, ce dernier se vaporisera et un fin brouillard d'eau et de contaminants salira toute la boîte de Pétri et peut-être la boîte à inoculation.
• En revanche, la manipulation d'une boîte de Pétri dont vous êtes sur qu'elle n'est pas contaminé ne nécessite pas de refroidissement total du scalpel. Le mycélium sera seulement un peu abîmé sur les bords, mais il repoussera quand même de plus belle.
• Pour l'incubation des boîtes à 25 deg. C. un lieu propre idéal est la boîte à inoculation.
• Ne pas oublier de maintenir le couvercle de la boîte de Pétri solidaire du reste à d'un élastique.

Recommandation pour les bocaux de seigle/boulettes

• Pour être vraiment sur que la stérilisation des pots contenants le seigle soit parfaite, il est avantageux de laisser le seigle tremper dans son liquide durant une nuit avant de le stériliser. En effet, les spores de micro-organismes non-désirables, sont moins sensibles à la chaleur lorsqu'ils sont desséchés. En les humidifiants, ils redeviennent plus vulnérables.

Recommandation générales

• Lors de inoculation, éviter les mouvements d'air, de tousser, de chanter, de siffler, etc.
• De l'eau enfermée dans un endroit non stérilisé est susceptible de devenir un nid de bactérie.
• Prendre garde à incuber le mycélium à sa température optimale : plus vite il poussera moins les contaminants auront l'occasion d'envahir le milieu avant lui.

Quelques mots sur les générateurs d'ions

La revue du florida mycology research center conseille vivement l'utilisation d'un générateur d'ions négatifs muni d'une base positive. Qu'est-ce donc ? Voici quelques explications.

Ces appareils sont des ionisateurs d'air qui fonctionnent suivant le principe d'effet de pointe : des petites pointes métaliques sont mises sous un potentiel électrique élevé. Grâce à l'effet de pointe, leur extrémité se trouve à un potentiel encore plus élevé, d'où arrachage (ou apport) d'électrons aux molécules d'air qui se trouvent à proximités. Ces molécules ayants aquises en potentiel de même signe que la pointe, elles en seront repousées, d'où création d'un courant d'air ionisé émanant de la pointe. Les ions ainsi crées vont se propager dans le milieu ambiant, se coller aux micro-particules en suspension dans l'air par effet electro-statiques, puis se déposer sur une surface au potentiel opposé, en l'occurence, soit les murs, soit la base positive du générateur.

En bref, outre l'apport bénéfique pour la santé que procure la ionisation, cela permet d'enlever diverses micro-particules (poussière, pollens, spores, ...) présentes dans une pièce. C'est exactement ce qu'il nous faut pour limiter les risques de contamination.

Se procurer un appareil de ce genre, à bas prix, est une autre affaire : pour ma part j'ai réussi à en trouver un dans un grand magazin au rayon fumeurs sous l'appellation de réducteur d'odeur provoquée par la fumeur de tabac, pour 20 Fr. (en solde).

Je l'utilise de la façon suivante :

Je nettoie la boîte à inoculation, je range tout dedans (y compris le générateur), je spraye une fois et j'allume le générateur durant 3 mn. Puis je procède à l'inoculation. De cette façon mon taux de contamination est proche de 0% (juré!)

Il parait qu'il est également possible de n'utiliser qu'un générateur et de se passer de la boîte, mais cela je ne l'ai pas testé.